酶促反应速率与酶分子的浓度成正比。当底物分子浓度足够高时，酶分子越多，底物转化的速率越快。但事实上，当酶浓度很高时，并不保持这种关系，曲线逐渐趋向平缓。根据分析，这可能是高浓度的底物夹带有许多的抑制剂所致。
在生化反应中，若酶的浓度为定值，底物的起始浓度较低时，酶促反应速率与底物浓度成正比，即随底物浓度的增加而增加。当所有的酶与底物结合生成中间产物后，即使再增加底物浓度，中间产物浓度也不会增加，酶促反应速率也不增加。还可以得出，在底物浓度相同的条件下，酶促反应速率与酶的初始浓度成正比。酶的初始浓度大，其酶促反应速率就大。
在实际测定中，即使酶浓度足够高，随底物浓度的升高，酶促反应速率并没有因此增加，甚至受到抑制。其原因是：高浓度底物降低了水的有效浓度，降低了分子的扩散性，从而降低了酶促反应速率。过量的底物聚集在酶分子上，生成无活性的中间产物，不能释放出酶分子，从而也会降低反应速率。
各种酶在最适的温度范围内，酶活性最强，酶促反应速率最大。在适宜的温度范围内，温度每升高10℃，酶促反应速率可以相应提高1～2倍。
不同生物体内酶的最适温度不同。如动物组织中各种酶的最适温度为37～40℃；微生物体内各种酶的最适温度为25～60℃，但也有例外，如黑曲糖化酶的最适温度为62～64℃；巨大芽孢杆菌、短乳酸杆菌、产气杆菌等体内的葡萄糖异构酶的最适温度为80℃；枯草杆菌的液化型淀粉酶的最适温度为85～94℃。
可见，一些芽孢杆菌的酶的热稳定性较高。过高或过低的温度都会降低酶的催化效率，即降低酶促反应的速率。
最适温度在60℃以下的酶，当温度达到60～80℃时，大部分酶被破坏，发生不可逆变性；当温度接近100℃时，酶的催化作用完全丧失。
酶在最适pH范围内表现出活性，大于或小于最适pH，都会降低酶的活性。
主要表现在两个方面：
①改变底物分子和酶分子的带电状态，从而影响酶和底物的结合；
②过高或过低的pH都会影响酶的稳定性，进而使酶遭受不可逆破坏。
能激活酶的物质称为酶的激活剂。
激活剂种类很多，主要有：
①无机阳离子，如钠离子、钾离子、铜离子、钙离子等；
②无机阴离子，如氯离子、溴离子、碘离子、硫酸盐离子、磷酸盐离子等；
③有机化合物，如维生素C、半胱氨酸、还原性谷胱甘肽等。
许多酶只有当某一种适当的激活剂存在时，才表现出催化活性或强化其催化活性，这称为对酶的激活作用。而有些酶被合成后呈现无活性状态，这种酶称为酶原。它必须经过适当的激活剂激活后才具活性。
凡能使酶的活性下降而不引起酶蛋白变性的物质称作酶的抑制剂。使酶变性失活（称为酶的钝化）的因素如强酸、强碱等，不属于抑制剂。它可降低酶促反应速率。酶的抑制剂有重金属离子、一氧化碳、硫化氢、氢氰酸、氟化物、碘化乙酸、生物碱、染料、对氯汞苯甲酸、二异丙基氟磷酸、乙二胺四乙酸、表面活性剂等。
对酶促反应的抑制可分为竞争性抑制和非竞争性抑制。与底物结构类似的物质争先与酶的活性中心结合，从而降低酶促反应速率，这种作用称为竞争性抑制。
竞争性抑制是可逆性抑制，通过增加底物浓度最终可解除抑制，恢复酶的活性。与底物结构类似的物质称为竞争性抑制剂。
抑制剂与酶活性中心以外的位点结合后，底物仍可与酶活性中心结合，但酶不显示活性，这种作用称为非竞争性抑制。
非竞争性抑制是不可逆的，增加底物浓度并不能解除对酶活性的抑制。与酶活性中心以外的位点结合的抑制剂，称为非竞争性抑制剂。
有的物质既可作为一种酶的抑制剂，又可作为另一种酶的激活剂。